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不同来源降香中柚皮素与异甘草素含量的高效液相色谱测定

时间:2017-12-13 08:00:10来源:www.xielunwen.net 作者:admin 点击: 85 次
作者:孙丽丽,王蕾,郭丽冰,沈志滨 【摘要】目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定降香中柚皮素和异甘草素含量的方法,比较不同来源的11批降香药材中的柚皮素和异甘草素的含量。方法采用HPLC法测定,以甲醇-0.2%磷酸水(60∶40)为流动相,检测波长为372nm(柚皮素)和290nm(异甘草素)。结果柚皮素在0.948~4.740μg范围内线性关系良好,r=0.9999;异甘草素在1.432~

               作者:孙丽丽,王蕾,郭丽冰,沈志滨

【摘要】  目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定降香中柚皮素和异甘草素含量的方法,比较不同来源的11批降香药材中的柚皮素和异甘草素的含量。方法采用HPLC法测定,以甲醇-0.2%磷酸水(60∶40) 为流动相,检测波长为372nm(柚皮素)和290 nm(异甘草素)。结果柚皮素在0.948~4.740 μg范围内线性关系良好,r=0.999 9;异甘草素在1.432~10.024 μg范围内线性关系良好,r=0.999 9。降香中的柚皮素含量在2.585~5.429 mg/g之间;异甘草素含量在7.526~28.329 mg/g之间。结论不同来源的降香药材中的柚皮素和异甘草素含量差异较大。该方法操作简便、快速、重复性好,适用于降香的质量控制。

【关键词】  高效液相色谱法; 降香; 柚皮素; 异甘草素

 降香Lignum dalbergiae Odoriferae主要含有挥发油和黄酮类成分。《中国药典》中对于降香的质量控制仅限于规定降香醇溶性浸出物不得少于8.0%[1],但是对单一成分未有明确的定量方法。本课题组对降香黄酮类成分进行了研究,从中分离得到7个化合物[2]。本文用自制的柚皮素和异甘草素为指标,建立HPLC含量测定方法,并测定了11个不同来源的降香药材中的柚皮素和异甘草素含量。

  1  仪器与试药
   
  Waters高效液相色谱仪(四元泵,二极管阵列检测器,自动进样);柚皮素、异甘草素对照品(实验室自制,经UV、1H-NMR鉴定结构,HPLC检测,面积归一化法计算,纯度大于98%);甲醇为色谱纯、乙醇等试剂为分析纯。
   
  本实验所用降香样品的来源见表1。表1  不同来源降香样品(略)

  2  方法与结果

  2.1  对照品溶液的制备精密称取柚皮素对照品4.74 mg于5 ml容量瓶中,甲醇溶解并定容至刻度,配制成质量浓度为0.948 mg/ml溶液,再经0.45 μm滤膜滤过得柚皮素对照品溶液。
   
  精密称取异甘草素对照品7.16 mg于5 ml容量瓶中,甲醇溶解并定容至刻度,配制成质量浓度为1.432 mg/ml溶液,再经0.45 μm滤膜滤过得异甘草素对照品溶液。

  2.2  供试品溶液的制备按照正交实验的结果,精密称取各样品粗粉2 g,在90℃下用70%乙醇提取3次,1.5 h/次,合并提取液,蒸干。残留物用70%乙醇溶解并定容至25   ml。经0.45 μm滤膜滤过得供试品溶液。

  2.3  HPLC含量测定

  2.3.1  色谱条件色谱柱为迪马公司Diamonsil C18(200 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相为甲醇-0.2%磷酸水(60∶40);体积流量为1.0 ml/min;柚皮素的检测波长为372 nm,异甘草素的检测波长为290 nm;进样量为10 μl;柱温30℃。

  2.3.2  检测波长的确定 紫外扫描柚皮素对照品溶液显示其最大吸收在372 nm处,异甘草素对照品溶液最大吸收为290 nm。因此以此波长作为含量测定的检测波长。

  2.3.3  线性关系考察柚皮素工作曲线:按“2.3.1”项下色谱条件,分别吸取柚皮素对照品溶液1,2,3,4,5 μl进样测定,记录峰面积,结果见表2。以峰面积×10-6为纵坐标,样品量为横坐标绘制标准曲线并计算得回归方程为Y=5.570 6X -1.8206,r=0.999 9,线性范围是0.948~4.740 μg。表2  柚皮素进样量与峰面积(略)
   
  异甘草素工作曲线:按“2.3.1”项下色谱条件,分别吸取异甘草素对照品溶液1,2,3,4,5,7 μl进样测定,记录峰面积。结果见表3。以峰面积×10-6为纵坐标,样品量为横坐标绘制标准曲线并计算得回归方程为Y=3.521 8X -1.575 2,r=0.999 5,线性范围是1.432~10.024 μg。表3  异甘草素进样量与峰面积(略)

  2.3.4  精密度考察精密吸取柚皮素对照品溶液5μl,按“2.3.1”项下色谱条件测定其峰面积,连续操作7次。测定结果为 =4.685μg,RSD=0.61%(n=7)。说明仪器精密度良好。

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