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胰岛素受体底物2在宫内发育迟缓大鼠胰腺组织中的表达

时间:2018-05-27 12:00:03来源:www.xielunwen.net 作者:admin 点击: 32 次
【摘要】目的观察宫内发育迟缓对胰岛β细胞上胰岛素信号分子胰岛素受体底物2的影响,探讨胎儿宫内发育迟缓个体发生胰岛素抵抗的分子机制。方法通过低蛋白饮食法建立宫内发育迟缓大鼠的动物模型,应用免疫组织化学法研究胰岛素受体底物2在正常饮食组大鼠及低蛋白饮食组大鼠在生后0,3,8周胰腺组织中的表达。结果低蛋白饮食致宫内发育迟缓大鼠在生后0,3,8周胰腺组织

【摘要】  目的 观察宫内发育迟缓对胰岛β细胞上胰岛素信号分子胰岛素受体底物2的影响,探讨胎儿宫内发育迟缓个体发生胰岛素抵抗的分子机制。方法 通过低蛋白饮食法建立宫内发育迟缓大鼠的动物模型,应用免疫组织化学法研究胰岛素受体底物2在正常饮食组大鼠及低蛋白饮食组大鼠在生后0,3,8周胰腺组织中的表达。结果 低蛋白饮食致宫内发育迟缓大鼠在生后0,3,8周胰腺组织中胰岛素受体底物2蛋白的表达水平均显著低于正常饮食组大鼠胰腺组织中胰岛素受体底物2的表达水平。结论 宫内发育迟缓对胰岛β细胞上胰岛素信号分子胰岛素受体底物2的影响导致胰岛素信号转导通路障碍,这可能是胎儿宫内发育迟缓鼠成年后发生胰岛素抵抗的原因之一。

【关键词】  胎儿生长迟缓; 胎儿/胚胎学; 受体,胰岛素; 大鼠; 动物,实验

    【Abstract】  Objective  To observe the expression of insulin receptor substrate?2 (IRS?2)on intrauterine growth retardation(IUGR),and to investigate molecular mechanisms for insulin resistance in IUGR rats.Methods  An IUGR animal model was established by protein malnutrition during pregnancy.Study the expression  of IRS?2 by immunohistochemistry at newborn,at 3 weeks and 8 weeks respectively on control group fed with common diet and IUGR low?protein diet group.Results  The level of protein of IRS?2 at newborn,3 weeks and 8 weeks of IUGR was significantly lower than that of control group respectively.Conclusion  IUGR can induce the obstacle of signal transduction and effecter molecule by impacting on IRS?2,which might be one of the molecular mechanisms of IUGR with insulin resistance at adult.

    【Key words】  Fetal growth retardation;  Fetus/Embryology;  Receptors,insulin;  Rats;  Animals,laboratory

    胎儿宫内发育迟缓(Intrauterine growth retardation,IUGR)是一种常见的妊娠并发症。国内IUGR发生率为6.39%~16.3%。其病因复杂,母亲孕期并发高血压、糖尿病或营养不良以及孕期吸烟和酗酒都可以导致IUGR,IUGR不仅近期可发生多种并发症,远期亦可发生深远影响。近10年来的流行病学调查证明,出生时体格大小与成年后的疾病如冠心病、高血压、2型糖尿病有密切关系。2型糖尿病和高血压常常同时发病,并与脂代谢异常,肥胖和胰岛素抵抗密切相关,其被称为代谢综合征,其共同发病基础为胰岛素抵抗,又称为胰岛素抵抗综合征。本研究拟通过孕期蛋白质营养不良法建立IUGR动物模型,研究IUGR个体生后0,3,8周胰腺组织中胰岛素受体底物2(Insulin receptor substrate?2,IRS?2)蛋白表达的变化,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的分子机制,为代谢综合征的早期防治提供理论依据。

    1  材料与方法

    1.1  实验动物  健康Wistar大鼠15只,体质量230~280 g,雄性3只,雌性12只,雌性均为处女鼠,大鼠由中国医科大学实验动物中心提供(动物合格证号SYXK(辽)2003?0019),大鼠雌雄比例按4∶1合笼,次晨8~9时涂片,以镜下见精子作为受孕第1天。孕鼠按受孕顺序随机分成低蛋白组和正常对照组,正常对照组孕鼠饲以标准饲料(热卡为15.83 kJ/g,蛋白质含量为23%);低蛋白组孕鼠自妊娠第1天起饲以低蛋白饲料(热卡为15.58 kJ/g,蛋白质含量为8%),饲料均由中国医学科学院实验动物研究所配制。所有孕鼠均自然分娩,称量12 h内新生仔鼠体质量精确到0.01 g。IUGR诊断标准:新生鼠出生体质量低于正常对照组出生平均体质量的2个标准差。

    1.2  标本取材  随机挑选8只不同窝别的IUGR新生仔鼠、3周龄鼠及8周龄鼠和相同数量的对照组新生仔鼠、3周龄鼠及8周龄鼠,处死后提取胰腺组织,置4%多聚甲醛中固定,备作石蜡切片。

    1.3  主要试剂  IRS?2一抗为羊抗鼠IgG,二抗为抗羊IgG,购自美国Santa Cruz公司。

    1.4  方法  采用免疫组织化学染色法,将切片贴附于多聚赖氨酸处理过的载玻片上,进行免疫组织化学染色,染色步骤如下:二甲苯脱蜡,3%过氧化氢封闭内源性过氧化物酶,枸橼酸盐煮沸,正常山羊血清封闭,一抗(工作浓度1∶50)湿盒中4 ℃过夜,二抗37 ℃孵育30 min,辣根酶标记链霉卵白素37 ℃孵育30 min,联苯二胺显色,苏木精复染,脱水,透明,封固。以磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照。阳性判断为细胞浆和细胞膜染为棕黄色。

    1.5  图像分析  采用Metan Lorph/EvolutionMp5.0/Bx51 Vs/Jp VIC/Olympus显微图像分析系统,对生后0,3,8周3个时期组织化学结果分析,每个时期选取8张切片,测其阳性反应部位平均密度值。

    1.6  统计学分析  采用SPSS 12.0统计软件包进行统计处理,测定结果用±s表示,P<0.05为差异有统计学意义。

    2  结果

    2.1  一般特性比较  低蛋白组IUGR发生率为54%(27/50),明显高于正常对照组的4.1%(2/48),差异有统计学意义(P<0.001)。与正常对照组体质量(4.935±0.320)g相比,低蛋白组出生体质量(3.923±0.220)g明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。

    2.2  不同时期胰腺组织中IRS?2蛋白表达情况  0周低蛋白组胰腺组织中IRS?2蛋白表达结果见图1。其阳性反应部位的平均密度值(0.806±0.064)明显低于正常对照组(0.875±0.035),差异有统计学意义(P<0.01),见图2。3周低蛋白组胰腺组织中IRS?2蛋白表达结果见图3。其阳性反应部位的平均密度值(0.754±0.092)明显低于正常对照组(0.855±0.063),差异有统计学意义(P<0.01),见图4。8周低蛋白组胰腺组织中IRS?2蛋白表达结果见图5。其阳性反应部位的平均密度值(0.480±0.082)明显低于正常对照组(0.570±0.089),差异有统计学意义(P<0.01),见图6。

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